血清脂蛋白的離心機分離技術

發(fā)布時間：

2014-03-04

概要：

血清脂蛋白是由血液中脂質與某些特異的蛋白質組成的一類不均一的復合物。

因其所含脂與載脂蛋白的比例不同，其密度范圍在0.96g/ml或更低至1.21g/ml之間。

紙電泳中顯示四條帶即：乳密顆粒，極低密度脂蛋白，低密度脂蛋白，高密度脂蛋白。每種脂蛋白還可以分為更多的亞組分。

用電泳法分離含載脂蛋白較高的組份（HDL，VHDL）比較成功，而離心分離法則適合用于各種密度的血清脂蛋白分離。

一、梯度材料：

血清脂蛋白密度較低，常用的梯度材料為Nacl,NaI,Kbr,KI等，常用的緩沖劑為ED。

表一常用梯度材料的配置及密度（20°C）
　　名稱配置密度（g/ml）
　　Nacl 0.196M 1.006
　　NaBr 0.804M 1.063
　　NaBr 2.705M 1.21
　　KBr 0.747M 1.063
　　KBr 1.496M 1.21
　　NaCl+KBr+EDTA 153gNaCl+354gKBr+10ml
　　0. 2MEDTA+水至總量1000ml 1.35
　　NaCl,NaBr
　　A液:200gNaCl+800ml水
　　B 液:400gNaBr+600ml水
　　C液11.14gNaCl+788.6ml水(ρ=1.006gml) 10ml A液+31.7mlB液
　　10ml A液+15.6mlB液
　　10ml C液+2ml 1.35液
　　4ml C液+6ml 1.35液 1.35
　　1.31
　　1.063
　　1.21

二、預分離：

1、血細胞與血清分離：
　　離心參數：全血，角轉頭，3，000rpm×20min
　　結果：沉淀為血細胞，上部為血清。

2、乳糜粒分離：禁食12小時以上人血漿中乳糜粒含量極少，已進食者因其血漿含乳糜粒高，應先離心去除乳糜粒。
　　離心參數：4 ×10 (g×min),10°C.各種轉頭轉速均可。
　　梯度液配置：離心管下部3/4容積加血漿，上部1/4容積加0。
　　5MnaCl+0.3MEDTA,ph7.4
　　結果：乳糜粒上浮，吸出。

3、血清蛋白分離：除去球蛋白，白蛋白及其它蛋白質。
　　離心參數：（2。5-3）×10 (g× hr), 各種轉頭均可。如角轉頭70，000rpm× 6hrs,10°C
　　配置：管容量1/3為血清，2/3為1。31g/ml,NaCl+NaBr,攪拌后終密度為1。21g/ml
　　結果：管上部1/6容積為血清脂蛋白，下部5/6為其它蛋白。

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